最近和好多实验室的小伙伴交流，大家普遍吐槽的一个点就是——公共细胞房的污染问题！辛辛苦苦养的细胞，说污染就污染，真的太让人抓狂了。
其实很多污染，都藏在我们容易忽略的细节里。让我们抛开复杂的理论，直接聊聊那些每天都要打交道的设备器材，看看怎么用几个小方法，把污染风险降到最低！
小编将分为几篇给大家仔细介绍细胞培养室各个器材使用时需要注意的事项。
第一弹：细胞培养的存放“温室”
二氧化碳培养箱
二氧化碳细胞培养箱主要由箱体、温控系统、湿度控制系统、气体控制系统和过滤系统等部分组成，旨在为细胞提供稳定的生长环境。作为细胞培养的存放“温室”培养箱内的污染主要来自细菌、真菌（霉菌和酵母菌）和支原体。其滋生根源可归结为“高温、高湿、营养丰富”的环境，而这恰恰是细胞培养所需的条件。在使用过程中需要注意的小细节有哪些呢？
1. 水盘——污染的“万恶之源”
隐患：培养箱底部的加热水盘为了维持湿度，提供了持续的液态水和恒定的温度（37°C），这简直是微生物繁殖的“完美温泉”。一旦污染，污染源会通过水蒸气循环扩散至整个箱体。
· 污染原因：
使用非无菌水：直接加入自来水或普通超纯水，自带大量微生物。
长期不更换：水盘成为微生物的温床，细菌、真菌
清洁不彻底：只换水，不擦拭水盘和内壁，残留的微生物会迅速再生。
· 预防手段：
使用无菌水，在无菌水中加入消毒剂或者抑菌剂（森贝伽BC-BA02-100mL），定期更换水盘中的液体，更换时注意清洗擦拭水盘。
图1 培养箱水盘换液 图片来源网络
图2 森贝伽 培养箱安全卫士
2. 空气循环系统——污染的“扩散器”
隐患：即使只有一个样本发生污染，其释放的微生物气溶胶会被培养箱内的循环风扇吹到各个角落，导致交叉污染，全军覆没。
· 污染原因：
HEPA过滤器失效或未安装：HEPA过滤器是阻挡外界和内部颗粒的关键。过滤器过期或未定期更换，则形同虚设。
风扇搅动：虽然保证了温湿度均匀，但也加速了污染物的传播。
· 预防手段：
选择培养箱时注意是否安装HEPA过滤器，注意细胞培养无菌操作确保放进培养箱的细胞无问题。
开关培养箱时注意随开随关，避免长时间开放培养箱同时减少开关频率。
3. 内胆结构与表面——污染的“藏身之所”
隐患：洒落的培养基、血清等营养物质会残留在搁架、内壁角落、门封条等处，为微生物生长提供“养料”。
· 污染原因：
设计缺陷：旧式培养箱内部的缝隙、螺丝孔、不平整的焊接点容易积聚污垢。
清洁死角：日常清洁无法触及所有角落，导致污染持续存在。
· 预防手段：
每月进行一次到两次培养箱整体消杀，消杀时用酒精擦拭培养箱内壁、搁架、门的内部面。
将细胞转移到培养箱时注意培养瓶外部擦拭，酒精棉擦拭或酒精喷壶喷洒，培养液的用量确保无液体溢出。
培养箱切勿倾斜放置，培养箱周围不要有噪音剧烈震动剧烈器材避免培养箱倾斜晃动影响培养瓶的静置培养。
4. 用户操作——污染的“引入者”
隐患：用户是最大的污染变量。
· 污染原因：
未消毒的手套和物品外表面：将未经酒精彻底擦拭的培养瓶、试剂瓶放入箱内。
频繁或长时间开门：导致内部环境剧烈波动，并引入外界不洁空气。
物品堆放过密：影响空气流通，造成局部微环境差异，并增加物品碰撞、洒漏的风险。
· 预防手段：
合理规划培养箱内部空间，避免“顶格”“靠边”“手拉手”。顶格：培养瓶垒的过高，这样的话不易拿取容易导致培养瓶倾倒；靠边：不要紧靠培养箱内壁，培养箱内壁有空气循环进出口靠边放置容易导致二氧化碳进入培养瓶影响培养液ph值；手拉手：培养瓶放置时可以竖向堆叠，一摞一摞间保持间隙方便拿取也保证培养箱内部空气循环的流通。
减少培养箱开门时间和频率。
图3 拿取细胞时用酒精进行喷洒，培养箱门随开随关
培养箱的污染防控是一个系统工程，而非单点任务。 其核心在于：
切断水源：严格管理水盘，杜绝微生物在水盘中得到温养。
净化空气：依靠有效的HEPA过滤器。
消除营养：通过彻底清洁，清洁掉培养箱内的培养液溢出和水蒸气污渍。
规范操作：实验人员严格遵守无菌操作
最有效的策略是：将“日常维护”作为铁律，并将“高温灭菌”作为最终的、定期的保障手段。 只有这样，才能为珍贵的细胞提供一个真正安全、稳定的“家”。
