在蛋白质组学飞速发展的今天，质谱（Mass Spectrometry, MS）已成为主流蛋白测序手段。然而，Edman降解（Edman degradation）作为一种经典的N端测序技术，依旧在特定场景中具有不可替代的价值。尤其是在确认蛋白质N端修饰、验证重组蛋白表达正确性或新型肽段结构鉴定方面，Edman降解以其直接、精确的特性发挥着独特作用。

什么是Edman降解？

Edman降解是一种基于化学反应的顺序性氨基酸切除方法，用于从多肽链N端开始逐个识别氨基酸残基。其原理由Pehr Edman于1950年提出，并迅速成为20世纪蛋白质一级结构研究的重要工具。

Edman降解的标准工作流程

Step 1：样品准备（Sample Preparation）

• 样本要求：高纯度、多肽链长度通常在30个氨基酸以内，N端未被修饰（如乙酰化或阻断）。
• 固定方式：通常将肽链通过共价键固定于固相载体（如PVDF膜），以便后续循环操作。

Step 2：N端氨基酸标记（Labeling）

• 使用苯异硫氰酸酯（PITC, phenylisothiocyanate）与N端氨基酸发生反应，形成PTH-氨基酸衍生物。
• 该反应在碱性条件下进行，通常控制在pH 9.0左右，以促进高效衍生化。

Step 3：选择性裂解（Cleavage）

• 在酸性条件（如三氟乙酸存在下）下，断裂N端氨基酸与多肽主链之间的肽键。
• 此步骤不会破坏剩余肽链，确保反应具有高度顺序性和循环性。

Step 4：PTH-氨基酸鉴定（Identification）

• 所得到的PTH-氨基酸通过高效液相色谱（HPLC）或毛细管电泳进行分离和鉴定。
• 每一个氨基酸都有独特保留时间，便于与标准品比对，完成定性分析。

Step 5：循环执行（Cycle Repetition）

• 剩余肽链重复步骤2-4，每一轮提取一个N端氨基酸，直到多肽链长度耗尽或信号减弱至无法检测。
• 通常Edman降解可稳定进行15–20轮，但在高质量样本与专业操作下，也能延伸至30个残基以上。

Edman降解的优势与局限

✅ 优势

• N端专一性强：对肽链起始残基有直接测序能力，适用于抗体、激素、信号肽验证等场景；
• 无需复杂数据库比对：不同于MS，Edman降解直接输出序列，避免算法偏差；
• 适合小分子肽段分析：尤其适合30个氨基酸以内的结构解析。

📌局限

• N端修饰限制：如N-乙酰化、N-甲酰化等会阻断反应；
• 效率递减：随着循环次数增加，背景噪音加剧，测序精度下降；
• 不适用于混合样本：多组分混杂时难以区分PTH-产物来源。

应用实例

在单克隆抗体开发过程中，Edman降解常被用于：

• 验证重组抗体的N端一致性；
• 确认Fab段、Fc段是否表达正确；
• 辅助质谱结果，增强结构确认的可靠性。

✅特别是在质谱未能明确区分N端修饰种类时，Edman降解可提供关键佐证信息。

尽管质谱已成为蛋白质测序主流，但Edman降解作为经典化学方法，依旧在结构确认、N端修饰验证等领域扮演着不可替代的角色。选择合适的测序策略，结合专业服务平台，是实现高质量科研或产品开发的关键。百泰派克生物科技整合经典Edman测序与现代质谱手段，为蛋白结构解析提供多维解决方案。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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